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非洲猪瘟病毒LAMP荧光检测试剂盒

作用与用途】 本试剂盒采用环介导等温扩增技术,用于检测猪口鼻拭子、扁桃体、脾脏等组织样品和血清中的非洲猪瘟病毒核酸DNA,检测结果可用于非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断。 【试剂盒组成】 试剂名称 规格及数量(48T) 备注 ASFV 荧光反应液(A) 624ul /管 ASFV 荧光反应液(B) 432ul /管 酶反应液 48 ul/管 阳性对照 60 ul/管 阴性对照 100 ul/管 【适用设备】恒温荧光扩增仪。 【样品前处理】 1、将样本(全血、组织研磨液、拭子等)上清10 ul加入到1.5 ml离心管中,加入100 ul Solution A,涡旋震荡20 s,室温静置3-5 min(或95℃金属浴振荡孵育3-5 min)。 2、样本充分裂解后(95℃金属浴振荡孵育的样本需恢复室温),加入100 ul Solution B,并涡旋震荡30 s。 3、处理后的样本如在2小时内进行下一步试验,请于4℃保存,如不能立即进行下一步试验,请于-20℃保存。 【检测方法】 1试剂准备(在试剂准备区进行) 1.1在室温下解冻保存于-20℃的各试剂,解冻后立即置于冰上保存。 1.2试剂配制(每份量反应mix的配置) 试剂 体系 AFSV荧光反应液(A) AFSV荧光反应液(B) 13×(n+1) μl 9×(n+1) μl 酶反应液 1×(n+1) μl 合计 23×(n+1) μl 混合注意事项:涡旋混合器混合时采用1秒×3次的方式?;旌瞎诩ち?,则有可能导致酶失活。 1.3将上述准备好的试剂转移至样本处理区,待用。 2样本处理及加样(在样品处理区进行) 2.1根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量准备反应管,向每个反应管加入23ul反应Mix。 2.2吸取已处理的样本DNA、阴性对照、阳性对照各2ul加入对应反应管,盖好管盖,转移至扩增区。 加样注意事项:依次加入阴性对照并盖好、样本DNA并盖好、阳性对照并盖好。 3 LAMP检测(在核酸扩增区进行) 3.1将PCR反应管放入恒温荧光扩增设备。 3.2设置反应体系为25ul; 步骤 温度 时间 备注 1 扩增 63℃ 50min 83℃热盖(若无此功能则忽略) 上机后注意事项:请不要打开试管盖,防止核酸污染实验室。 4结果判读 5.1质量控制:50分钟内阴性对照无扩增曲线、阳性对照有明显扩增曲线。 5.2 结果判读:50分钟内待测样本有明显扩增曲线判为阳性;否则判为阴性。 【注意事项】 1、请务必在-20℃保存本试剂盒,避免没有必要的冻融操作。 2、试剂室温解冻,制备与保存请在冰上进行。 3、避免剧烈涡旋振荡,防止酶失活 4、实验结束后,避免开盖,防止污染实验室。 5、试剂配制与阳性样本分区操作。
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